Вопрос ветеринару

Методы диагностики лейкоза КРС

CeC614vn46

CeC614vn47

CeC614vn48

Вопрос ветеринару

Николай ДВОЕГЛАЗОВ, канд. вет. наук, старший научный сотрудник лаборатории лейкоза ИЭВСиДВ СФНЦА РАН

Методы диагностики лейкоза КРС

Прежде всего, напомним, что лейкоз КРС относится к так называемым медленным инфекциям. Группа данных заболеваний имеет ряд характерных проявлений: необычно продолжительный инкубационный период (годы), медленно прогрессирующий характер течения процесса, необычность поражения органов и тканей и неизбежный летальный исход.

При лейкозе выделяют несколько стадий развития болезни. Для каждой из них разработаны свои методы диагностики, которые, с одной стороны, позволяют определить конкретную стадию у животного, с другой – говорить о том, что обнаруженные изменения относятся именно к лейкозу КРС. Если смотреть от момента инфицирования, то выделяют следующие стадии: инкубационную, гематологическую и опухолевую (или терминальную).

Методы диагностики бывают: прижизненные и посмертные. К прижизненным относятся клинический, гематологический, серологический и генно­молекулярный. При падеже или вынужденном убое у животных могут находить характерные для лейкоза изменения при помощи патоморфологических и гистологических исследований.

Начнем рассмотрение методов в хронологическом порядке – по мере того, как они возникали. О болезни узнали (первые случаи регистрировали еще в конце 19 века) потому, что на фермах крупного рогатого скота начал происходить падеж, а в тушах находили изменения внутренних органов и тканей (патоморфологический метод). При попытках понять причины падежа отметили, что до смерти у таких животных внешне есть некоторые отклонения от нормального состояния: увеличенные лимфоузлы, экзофтальм, сильное исхудание и др. (клинический метод). В течение 70 лет исследователи могли регистрировать только подобные проявления болезни, не понимая их причины. Значительно позже, в середине прошлого столетия, обнаружили взаимосвязь между клиническими признаками и изменениями в крови. При лейкозе они имели свою специфику, позволяющую отличать данное заболевание от других патологических состояний инфекционной и незаразной природы (гематологический метод). Спустя еще пару десятилетий, после установления вирусной природы лейкоза и обнаружения противовирусных антител, были разработаны первые методы, которые позволяли выявлять инфицированных животных до появления каких­либо видимых проявлений болезни (серологические методы). А также методы, позволявшие обнаруживать непосредственно сам вирус, – генно­молекулярные, такие как полимеразная цепная реакция (ПЦР).

Далее раскроем суть методов подробнее.

Патоморфологический метод

При вскрытии трупов или послеубойном осмотре туш и органов животных обращают внимание на величину пораженных органов, распространенность опухолевых разрастаний, их связь с кроветворными или лимфоидными (костный мозг, лимфатические узлы, селезенка), а также другими органами и тканями.

В зависимости от степени распространения опухолевых разрастаний в организме лейкозы подразделяются на системные и опухолевые. При системных лейкозах поражаются одновременно все органы гемо­ и лимфопоэза (лимфатические узлы, селезенка, костный мозг). При опухолевых характерна изначальная очаговость поражения лимфоидной ткани, и в первую очередь лимфатических узлов.

Наиболее распространенными формами лейкоза у крупного рогатого скота являются лимфоидный лейкоз и лимфосаркома, реже встречается лимфогранулематоз и очень редко остальные формы болезни.

При лимфоидном лейкозе у животных в 100 % случаев в опухолевой процесс вовлечена селезенка. Капсула ее обычно напряжена, фолликулы гиперплазированы. В селезенке и лимфатических узлах наблюдаются стирания рисунка за счет диффузной пролиферации лимфоидных клеток различной степени дифференциации. Лимфатические узлы в той или иной степени увеличены. На разрезе поверхность саловидная, серо­белого цвета, часто с очагами кровоизлияний и некроза.

При опухолевых формах лейкоза селезенка и костный мозг остаются обычно без изменений. Лимфатические узлы часто имеют асимметричное увеличение. Капсула шероховатая, сросшаяся с соседними органами и тканями. Поверхность разреза серо­белого, серо­желтого цвета, часто с обширными очагами кровоизлияния и некроза. Постоянно выявляют плотные опухолевые образования различной величины и формы, которые образуют иногда большие конгломераты.

При неклассифицируемом лейкозе регистрируются новообразования в тазовой полости.

В остальных органах и тканях (печени, почках, органах пищеварения, матке, скелетной мускулатуре), которые вовлекаются в опухолевой процесс на поздних стадиях развития заболевания, отмечают диффузные или очаговые серо­белые разрастания различной формы и величины.

Гистологический метод

Суть его в том, что в кусочках органов и тканей больного животного обнаруживают характерные для лейкозного процесса изменения в виде диффузных или очаговых разрастаний из размножающихся, нарушивших нормальное созревание и дифференцировку, кроветворных клеток. При разных формах лейкоза также дополнительно обнаруживают ряд специфичных для них признаков, позволяющих проводить дифференциацию.

Клинический метод

Симптомокомплекс при лейкозе крупного рогатого скота обусловлен функциональными нарушениями и морфологическими изменениями в органах и тканях и зависит от опухолевого поражения той или иной системы органов, а полнота их проявления – от стадии течения лейкозного процесса. В предлейкозном состоянии и в начальной стадии болезни клинические симптомы обычно отсутствуют, сохраняются продуктивность и воспроизводительная функция животного. Первые клинические признаки появляются в развернутой стадии лейкоза и прогрессируют по мере его развития. Переход гематологической (субклинической) стадии в клиническую часто происходит после отела, при интоксикации, вторичной инфекции, на фоне стрессовых воздействий.

Помимо органов кроветворения, часто в патологический процесс вовлекаются другие внутренние органы, не имеющие непосредственного отношения к кроветворению. Поэтому в клинических симптомах можно выделить специфические, характеризующие лейкоз, и неспецифические, отображающие функциональное нарушение той или иной системы органов вследствие их опухолевых поражений.

Неспецифические симптомы представляют собой расстройства общего характера, которые могут наблюдаться при многих болезнях. Чаще всего они выражаются в ухудшении общего состояния животного, плохом усвоении кормов, отсутствии аппетита, снижении удоя, быстрой утомляемости, недомогании и прогрессирующем исхудании. При поражении желудочно­кишечного тракта наблюдается расстройства пищеварения, ослабление сердечной деятельности, цианоз и желтушность слизистых оболочек, нарушение дыхания, отеки в области подгрудка, живота, вымени и подчелюстного пространства.

При сдавливании нервных стволов конечностей или прорастании лейкозной опухоли в спинномозговой канал отмечается хромота на одну или обе задние конечности и слабость, животное с трудом встает или вообще не поднимается.

Поражение мочевого пузыря или преддверия влагалища сопровождается затруднением выделения мочи, а поражение матки – абортом и яловостью.

Характерные симптомы выражаются в увеличении поверхностных (предлопаточных, околоушных, подчелюстных, надколенных, надвыменных и др.) и доступных ректальному исследованию внутренних лимфатических узлов, селезенки и печени, в появлении опухолевых разрастаний в различных частях тела, органах и орбитах глаз. Последние обусловливают нередко экзофтальмию (пучеглазие) с нагноением глазного яблока. Довольно часто наблюдается последовательное поражение лимфатических узлов, поэтому размеры их варьируют от грецкого ореха до детской головы.

При лейкозе нередко обнаруживают узлы, которые в норме не прощупываются (околоушные, дополнительные надвыменные, шейные и отдельные подкожные, расположенные в различных частях тела). В области голодной ямки, на грудной клетке, в подгрудке, на ребрах, лопатке обнаруживают мелкие, размером до голубиного яйца подкожные лимфоузлы.

К специфическим клиническим симптомам относится и увеличение селезенки, границы которой легко установить при перкуссии. Степень поражения селезенки зависит от формы болезни. При лимфолейкозе селезенка может быть увеличена в несколько раз и достигать массы 25 кг. Сильное увеличение селезенки сопровождается высоким лимфоцитозом в периферической крови, иногда наблюдают разрыв капсулы и внезапную смерть животного от внутреннего кровотечения.

Клиническую стадию лейкоза часто обнаруживают зимой, в конце стельности и в начале лактации. Это объясняется снижением резистентности организма.

Лейкоз у крупного рогатого скота протекает в большинстве случаев хронически. Острое и подострое течение болезни наблюдается лишь в 5­10 % случаев. Поэтому удельный вес клинических симптомов в диагностике лейкозов невелик.

Наряду с энзоотическим лейкозом крупного рогатого скота имеет место и лейкоз молодняка с нередким опухолевым поражением зобной железы. При этом наблюдают затрудненное дыхание, хрипы и слизистое истечение из носовой полости. Диагноз ставят по увеличенным лимфоузлам.

В редких случаях лейкоз может протекать в кожной форме. На теле животного появляются узелковые припухлости по 2,5 см в диаметре, хорошо заметные на шее, спине, крестце и бедрах. Через несколько месяцев происходит инфильтративное поражение внутренних органов, и животное погибает.

Таким образом, характерные клинические признаки, а также опухолевые поражения органов брюшной и тазовой полостей, устанавливаемые ректальным исследованием, являются достоверными диагностическими признаками лейкоза. Неспецифические симптомы, отражающие опухолевые поражения внутренних органов, только в сочетании с показателями крови приобретают диагностическое значение.

Гематологический метод

Этот метод является одним из основных, позволяющих достоверно поставить прижизненный диагноз на лейкоз. Метод заключается в подсчете количества лейкоцитов в единице объема крови и качественной оценке лимфоидных элементов – лимфоцитов. Изменения оцениваются по лейкозному ключу, составленному с учетом возраста животных. В крови отмечают резкое увеличение уровня лейкоцитов, преимущественно за счет лимфоцитов.

Необходимо отметить, что гематологическому исследованию подвергаются только животные, в сыворотке крови которых серологическим методом обнаружены специфические антитела к ВЛКРС.

Животных, находящихся в гематологической стадии лейкоза, часто называют больными или гембольными. Таким образом, проводя различие между инфицированными животными с изменениями в крови и без них. Однако подобное разделение более чем условно, потому что и те, и другие являются носителями вируса и никогда от него не освободятся (на данном этапе развития ветеринарной науки) и при этом выступают источниками инфекции для здоровых животных. Следовательно, нахождение таких животных в стаде несет постоянную угрозу для свободных от вируса животных.

Серологические методы

Методы основаны на выявлении в сыворотке крови животных при помощи специальных компонентов тест­систем антител к антигенам вируса лейкоза. Специфические антитела появляются в крови через 1­2 мес. после заражения животного вирусом лейкоза и сохраняются пожизненно.

Существует два основных серологических метода – реакция иммунодиффузии или диффузной преципитации в геле агара (РИД, РДП) и иммуноферментный анализ (ИФА).

Серологическому исследованию на лейкоз подвергают животных в возрасте от 6 месяцев и старше. Пробы крови для исследований берут не ранее чем через 30 суток после введения животным вакцин и аллергенов, у стельных животных – за 30 суток до отела или через 30 после него.

Данные методы обладают высокой специфичностью и достаточной чувствительностью, для того чтобы производить объективную оценку эпизоотической ситуации по лейкозной инфекции, а также осуществлять с их помощью оздоровительную работу на сельхозпредприятиях.

ИФА по отношению к РИД имеет ряд преимуществ: является более высокочувствительным, что позволяет с его помощью выявлять большее число инфицированных животных (дополнительно к РИД может выявлять животных с низким содержанием антител в крови); в ИФА можно наряду с сывороткой крови исследовать молоко, молозиво или сухостойный секрет; может быть автоматизирован; вся постановка занимает несколько часов в отличие от 3 дней, требующихся для проведения РИД.

Генно­молекулярный метод

ПЦР представляет собой метод, проходящий in vitro, при котором происходит экспоненциальное увеличение специфического фрагмента последовательности ДНК. ПЦР позволяет обнаруживать геном как вируса (РНК), так и провирусной ДНК (встроенной в геном клеток хозяина) на самых ранних стадиях инфицирования, еще до появления в организме первых специфических противовирусных антител. Первые ПЦР исследования, направленные на выявление ВЛКРС­провируса у крупного рогатого скота, провели H.M. Naif et al. в 1990 году. Также метод позволяет выявлять животных с низкими, для выявления серологическими методами, титрами антител и у толерантных животных – такие животные появляются при внутриутробном заражении плода в первый триместр стельности, они являются вирусоносителями и источником болезни, но сами не вырабатывают антител против вируса лейкоза (ВЛКРС).

Заключение

На современном этапе борьбы с лейкозом для диагностики заболевания широко применяются серологический и гематологический методы. В отдельных регионах применяют ПЦР. И только повсеместное использование методов ранней диагностики позволяет избегать встречи с клиническими и патоморфологическими проявлениями данного заболевания, которые еще каких­то 50–60 лет назад можно было увидеть довольно часто. Использование только гематологического метода не позволяет осуществлять оздоровительную работу в стаде, т.к. он служит исключительно для выявления животных повышенного риска перехода в опухолевую стадию. Поэтому эффективная борьба с лейкозом должна строиться на своевременной серологической и молекулярной диагностике с разделением стада на группы здоровых и инфицированных особей, с постепенной элиминацией последних.

CeC 6(14) 2019

 
 
 
Баннер
Баннер
Баннер
Баннер
Закрыть

У нас новый сайт!

Вся актуальная информация на новом сайте!

idsmedia.ru

Перейти